Mossviolen är flerårig och sprider sig vegetativt med krypande jordstammar. Den är kalkgynnad och kräver ganska näringsrik och välbuffrad mark. Arten växer nog alltid på organisk jord, ofta torv eller mullrika svämsediment. Typiska miljöer är fastmattor i extremrikkärr, fuktängar och flacka stränder vid rinnande vatten. Den gynnas av översvämningar. Mossviolen växer inte bara öppet utan även i sluten skog. Den fordrar dock ört- och mullrika skogstyper, gärna kalkpåverkad fuktig granskog eller lövskog i anslutning till våtmarker och stränder.