Tvåblad växer i skugga eller halvskugga på näringsrik mulljord i glesa, ängslövskogar och lundar med hassel men också i öppnare miljöer som igenväxande hagmarker. Oftast ser man den där tillsammans med gullviva och blåsippa. Arten förekommer också i fuktigare miljöer som sluttningskärr och sumpskog.